Качеровская Е.Р. врач лабораторной диагностики;
Чиж О.В.врач лабораторной диагностики
Нормальная микрофлора кишечника выполняет функцию экологического барьера, предотвращающего его колонизацию патогенными микроорганизмами.
Нарушение нормальной микрофлоры при принятии антибиотиков может привести к чрезмерному росту эндогенных или нозокомиальных патогенных микроорганизмов, таких как Clostridium difficile.
- difficile является основным этиологическим агентом псевдомембранозного колита, связанного с приемом антибиотиков. Псевдомембранозный колит (ПМК) - острое заболевание кишечника, развивающееся как осложнение антибактериальной терапии и характеризующееся наличием бляшковидных и узелковых псевдомембран в толстом кишечнике (чаще в дистальном отделе ободочной кишки и сигмовидной кишки). При отсутствии лечения исход может быть летальным. Помимо ПМК, C. difficile может быть ассоциирована с более легкими формами колита - антибиотикассоциированный колит (ААК) и антибиотикассоциированная диарея (ААД) на фоне приема антибиотиков.
Нозокомиальное приобретение C. difficile является серьезной проблемой медицинских учреждений, в частности, учреждений с большой плотностью стационарных больных, отделений химиотерапии, а также при долгосрочном нахождении пациентов в стационаре. Грудные дети и больные муковисцидозом являются асимптоматическими носителями токсикогенных штаммов C. difficile с частотой 50 % и 32 % соответственно.
Клиническая диагностика C. difficile основана на нескольких критериях, как правило: диарея с частотой опорожнения кишечника не менее 6 раз за 36 часов (как минимум трехкратный неоформленный стул за сутки) у пациентов, получавших антибиотикотерапию в пределах 8 недель до начала диареи, при отсутствии других очевидных причин диареи, улучшение состояния пациента при лечении.
Изоляты C. difficile могут быть как токсикогенными, так и не токсикогенными. Токсикогенные штаммы C.difficile продуцируют энтеротоксин (токсин A) и цитотоксин (токсин B) а приблизительно эквивалентных количествах.
Тем не менее, некоторые штаммы (серогруппы F) продуцируют токсин B, но не продуцируют токсин A. Эти штаммы можно не определить повсеместно используемыми методами диагностики, основанными на определении только токсина А.
Тест VIDAS C. difficile Toxin A & B (проводится в лаборатории УЗ «3-я ГКБ им.Е.В.Клумова») предназначен для диагностики заболеваний, связанных с наличием Clostridium difficile путем определения токсинов А и В C. difficile в фекалиях.
Для следующих микроорганизмов не было установлено перекрестной реактивности или интерференции при проведении теста VIDAS C. difficile Toxin A & B:
Staphylococcus aureus ssp aureus
Shigella flexneri
Shigella dysenteriae
Shigella sonnei
Salmonella group B (paratyphi B)
Salmonella enteritidis
Pseudomonas aeruginosa
Escherichia coli 0157:H7
Escherichia coli
Candida albicans
Enterococcus faecalis
Yersinia enterocolitica
Bacteroides fragilis
Campylobacter jejuni ssp jejuni
Campylobacter coli
Vibrio cholerae
Aeromonas hydrophila ssp hydrophila
Peptostreptococcus anaerobius
Porphyromonas assacchrolyticus
Clostridium sporogenes
Clostridium bifermentans
Clostridium histolyticum
Clostridium difficile (не токсикогенный) VPI 0210114
Clostridium butyricum
Clostridium subterminale
Clostridium sordelli*
Clostridium perfringens
Clostridium tertium
Clostridium tetani
Clostridium septicum
Clostridium innocuum
Clostridium novyi
Возможна перекрестная реактивность с C.sordelli VPI9048, в зависимости от условий культивирования.
Бактериологический диагноз основан на обнаружении в стуле токсинов В и/или А C. Difficile. Два золотых стандарта, исследование цитотоксичности на клеточной культуре и посев на селективную питательную среду с определением токсикогенности, занимают много времени (минимум 24-48 часов) и плохо стандартизированы.
Для повышения чувствительности и скорости диагностики в настоящее время рекомендуется двухступенчатый алгоритм. На первом этапе выявляют глутаматдегидрогеназу (ГДГ) в стуле, а на втором – подтверждают положительные результаты при помощи второго теста на обнаружение токсинов.
Оценивая результаты тестирования, врач должен учитывать клинические признаки и историю болезни пациента.
Правила забора кала для исследований на Clostridium difficile
Специальной подготовки к исследованию не требуется.
Ограничений в диете нет.
Соберите образец кала в чистую пробирку.
Важно: Образец должен быть собран без добавления какого-либо химического или биологического вещества в пробирку для сбора образца.
Не используйте контейнеры для образцов, содержащие детергенты, консерванты и среды, поскольку это может привести к получению неверных результатов.
Образцы можно хранить до начала обработки в течение 3 суток (с момента взятия) при 2 - 8°C без значительной потери определяемых количеств токсинов А и В C. difficile.
Более длительное хранение при 2 - 8°C не рекомендуется.
При необходимости более длительного хранения образцы можно заморозить и хранить при -70 °C ± 10°C до 1 месяца.
Не замораживайте образцы повторно.
В ходе клинических исследований не было обнаружено интерференции при тестировании образцов, содержащих большие количества слизи или крови при определении токсинов А и В C. Difficile
При определении ГДГ возможно взаимодействие с некоторыми лекарственными средствами и другими потенциальными интерферирующими веществами (гемоглобин, липиды, муцин, амоксициллин, висмута салицилат, кальция карбонат, цефтриаксон, бензалкония хлорид, ципрофлоксацин, эритромицин, этанол, фидаксомицин, гентамицин, минеральное масло, гидрокортизон, алюминия гидроксид, магния гидроксид, лидокаин, лоперамид, месалазин, метронидазол, напроксен, нистатин, фенилэфрин, сеннозид, тергитол, тетрациклин, ванкомицин), превышающими определенные концентрации.
При получении спорного результата при определении токсинов А и В C. Difficile, рекомендуется повторить анализ с повторно взятым образцом, поскольку распределение токсинов в некоторых образцах может быть неравномерным.
Новый образец должен быть взят в течение двух недель, должен согласовываться с клинической картиной и историей болезни. При повторном получении спорного результата образец следует протестировать другим методом.
Оценивая результаты тестирования, врач должен учитывать клинические признаки и историю болезни пациента.
УЗ «3-я ГКБ им.Е.В.Клумова» проводит на платной основе исследования для диагностики заболеваний, связанных с наличием Clostridium difficile путем определения в фекалиях:
- глутаматдегидрогеназы (VIDAS C. Difficile GDH)
- токсинов А и В C. difficile (VIDAS C. difficile Toxin A & B).